Plateformes de recherche

La cytométrie en flux (CMF) est une technologie polyvalente qui permet de quantifier la fluorescence et les caractéristiques structurelles des particules (le plus souvent des cellules). Les analyseurs CMF permettent une analyse quantitative rapide des particules en suspension ou des protéines solubles provenant du sérum, des cellules fractionnées, des cellules trypsinées ou des tissus dissociés. Les chercheurs et les cliniciens peuvent obtenir plusieurs statistiques au niveau d’une cellule unique et d’une population. Les trieurs de cellules peuvent également analyser les particules et, en outre, séparer physiquement les cellules d’intérêt à un niveau de pureté élevé pour les essais en aval. Une liste non exhaustive des différents essais de cytométrie en flux est présentée ci-dessous.

Un cytomètre en flux comporte trois composants principaux : la fluidique, l’optique et l’électronique. Grâce à un contrôle exquis de la pression et à une conception précise de la cellule d’écoulement ou de la buse, le système fluidique concentre l’échantillon de manière hydrodynamique et aligne les cellules en file indienne. Les cellules traversent ensuite le cœur du système, le point d’interrogation, où le système fluidique rencontre le système optique.

L’optique est composée de modules d’excitation et de collecte de la lumière. Au point d’interrogation, des lasers sont utilisés pour scanner chaque cellule l’une après l’autre afin d’évaluer leurs paramètres physiques et fluorescents. La quantité de lumière diffractée en ligne avec le laser (Forward Scatter ; FSC) donne une indication de la taille et la diffraction du laser à environ 90o (Side Scatter, SSC) donne une indication de la complexité ou de la granularité de la cellule. En outre, les cellules peuvent être marquées avec des protéines rapporteuses, des colorants fluorescents ou des anticorps marqués par fluorescence, qui marquent sélectivement les cellules d’intérêt. Ces ensembles de marqueurs ou panneaux de couleurs doivent être soigneusement choisis pour être excités par la source de lumière d’excitation disponible (lasers) et émettre une fluorescence à une longueur d’onde d’émission de la lumière qui est distinctement collectée par les filtres passe-bande disponibles.

Les composants électroniques utilisent des photodiodes et des tubes photomultiplicateurs (PMT) ultrasensibles pour convertir la lumière, définie par les filtres passe-bande, en impulsions électroniques. Ces impulsions sont intégrées, numérisées et envoyées à la station d’acquisition, où les données peuvent être interprétées.

L’avantage de l’utilisation de la CMF est qu’il s’agit d’un système extrêmement rapide et qu’une quantité relativement faible d’échantillon est nécessaire. En outre, dans le cas de la CMF multiparamétrique, plusieurs paramètres ou couleurs fluorescents sont analysés simultanément. Nous pouvons par exemple identifier le phénotype et vérifier la viabilité, la vitalité, la capacité de prolifération et l’état du cycle cellulaire de chaque cellule. Par conséquent, comme des milliers de cellules peuvent être rapidement analysées, nous pouvons identifier des populations de cellules extrêmement rares et obtenir des statistiques de population avec une plus grande précision.